Sustav tekućinskog kromatografa visoke učinkovitosti (HPLC) važna je grana kromatografije i nezamjenjiva je tehnologija razdvajanja i analize u poljima moderne kemije, medicine, industrije, poljoprivrede, inspekcije robe i sudske inspekcije. Koristi tekućinu kao mobilnu fazu i koristi visokotlačni infuzijski sustav za pumpanje jednog otapala s različitim polaritetima ili miješanih otapala, pufera itd. u kromatografsku kolonu opremljenu stacionarnom fazom visoke učinkovitosti. Nakon razdvajanja komponenti u koloni ulaze u detektor na detekciju, čime se postiže učinkovita, brza i osjetljiva analiza uzorka.
Strukturne komponente
Sustav tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti uglavnom uključuje spremnike za pohranu tekućine, visokotlačne pumpe za infuziju, uzorkivače, kromatografske kolone, detektore, snimače i uređaje za obradu podataka. Među njima je visokotlačna infuzijska pumpa jedna od temeljnih komponenti cijelog sustava, koja je odgovorna za slanje mobilne faze u kromatografsku kolonu sa stabilnim tlakom i protokom. Kromatografska kolona ključna je komponenta odvajanja, ispunjena stacionarnom fazom s iznimno finim česticama. Koeficijenti raspodjele različitih spojeva između stacionarne i mobilne faze su različiti, čime se postiže razdvajanje. Detektor pretvara odvojene komponente u električne signale, te šalje graf i rezultate kroz snimač i uređaj za obradu podataka.
Kako to radi
Princip rada sustava tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti temelji se na principu odvajanja kromatografije, to jest, kada svaka komponenta otopljena u mobilnoj fazi prolazi kroz stacionarnu fazu, ima različite veličine i jačine interakcije sa stacionarnom fazom (adsorpcija, distribucija, isključenje i afinitet), a vrijeme zadržavanja u stacionarnoj fazi je različito, tako da istječe iz stacionarne faze jedna nakon drugi. Konkretno, visokotlačna pumpa prodire u mobilnu fazu u spremniku tekućine u sustav, a otopina uzorka ulazi u mobilnu fazu kroz injektor i puni se u kromatografsku kolonu dok mobilna faza teče. Budući da su koeficijenti distribucije komponenata u otopini uzorka različiti u mobilnoj fazi i stacionarnoj fazi, kada se dvije faze pomiču jedna u odnosu na drugu, nakon kontinuiranog procesa distribucije adsorpcije-desorpcije, razmak između pomiješanih komponenata postupno se povećava i na kraju istječe iz kolone u nizu kao zasebne pojedinačne komponente. Detektor pretvara koncentraciju uzorka u električni signal i šalje ga snimaču za ispis podataka uzorka u obliku grafikona.
Prednosti i primjene
Sustav tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti ima karakteristike visoke učinkovitosti odvajanja, velike brzine analize, dobre osjetljivosti detekcije i sposobnosti analize i odvajanja termički nestabilnih fiziološki aktivnih tvari s visokim vrelištem i ne mogu se ispariti. Raspon njegove primjene je širok i gotovo nije ograničen hlapljivošću i toplinskom stabilnošću analitičkih objekata. Gotovo svi spojevi, uključujući visoko vrelište, polaritet, ionske spojeve i makromolekularne tvari, mogu se analizirati i odrediti tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti. U poljima farmacije, tradicionalne kineske medicine i tradicionalne kineske medicine, znanosti o hrani i tehnologije, sustavi tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti naširoko se koriste u analizi lijekova, istraživanju otisaka prstiju kineske medicine, otkrivanju ostataka pesticida, analizi prehrambenih komponenti hrane itd.
Trendovi razvoja
S brzim razvojem moderne biotehnologije i farmaceutske industrije, sustavi tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti također se stalno razvijaju i poboljšavaju. Trenutačni razvojni trend je okrenut prema biokemijskoj analizi i analizi i pripremi lijekova, te razvoju učinkovitijih, osjetljivijih i bržih metoda odvajanja i analize. Istodobno, kao odgovor na probleme velike potrošnje i toksičnosti mobilnih faza, aktivno se istražuju ekološki prihvatljive i održive alternative.
Ukratko, sustavi tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti igraju sve važniju ulogu u polju moderne znanosti i tehnologije sa svojim jedinstvenim mogućnostima odvajanja i analize te širokim mogućnostima primjene.
